SOP文件:酯酶染色-中性非特异性脂酶(α—NAE)染色

　　SOP文件:酯酶染色-中性非特异性脂酶(α—NAE)染色

[方法学]

　　酯酶染色的方法很多，根据与pH底物等不同作用，将常用的酯酶染色法分为两大类，即特异性酯酶染色和非特异性酯酶染色。后者又可分为3类：①中性非特异性酯酶染色法：α—乙酸菜酚酯酶、乙酸菜酚酯酶和乙酸菜酚AS-D酯酶。②酸性非特异性酯酶染色法：α—乙酸菜酯酶和α—丁酸菜酯酶。②碱性非特异性酯酶染色法：α—丁酸菜酯酶。中性非特异性酯酶染色是单核细胞与粒细胞白血病区别的重要方法，一般实验室可选用此法。

[原理]

　　α—乙酸萘酚经酯酶水解产生萘酚，萘酚与重氮盐偶联，生成灰黑或棕黑色沉淀物，定位于胞浆中。

[试剂]

　　1.α—醋酸萘酯丙酮液：α—醋酸萘酯1g，加丙酮和蒸馏水混合液100m1，溶解后贮于磨口带塞三角瓶内，4℃保存，可使用半年。

　　2.pH7.4磷酸盐缓冲液：0.07MNa2HPO4(即Na2HPO4)

　　3.基质液：磷酸盐缓冲液82ml，缓慢滴加α-醋酸萘酯丙酮液1.6ml(滴速约每分钟40滴)，边加边用力振摇。根据5分钟后，加坚牢蓝B80mg，剧烈振摇10分钟，立即过滤，滤液两杯，各40ml。

　　4.氟化钠基质液：称取氟化钠(NaF)61mg加入上述其中基质液1杯内，混匀后，标上标记。

[操作]

　　(1)新鲜涂片两张，分别标上NSE和NaF记号，滴加10%甲醛生理盐水，固定5分钟，用自来水轻轻冲洗，当心血膜脱落，晾干。

　　(2)两张涂片同时放入各自染色杯内，37℃水浴1小时。

　　(3)取出后水洗，晾干后镜检。不用复染。

[结果观察]

　　在胞浆内若有棕黑色或灰黑色弥漫性颗粒沉淀者为阳性，细胞脑浆为黄色者为阴性。

[临床意义]

　　1.阳性：单核细胞和组织细胞呈强阳性，但可被氟化钠抑制;巨核细胞及血小板呈阳性;早幼粒细胞白血病时早幼粒细胞可阳性，且不受氟化钠抑制。

　　2.弱阳性及阴性：粒细胞、淋巴细胞一般为阴性，若有弱阳性也可被氟化钠抑制。

　　3.临床鉴别：主要用于鉴别急性单核细胞性白血病与急性粒细胞性白血病，前者NSE阳性，且受氟化钠(NaF)抑制;而后者NSE阴性，若有阳性也不受氟化钠抑制。

[附注]

　　(1)坚牢蓝B和氟化钠可小包分装后干燥器保存

　　(2)基质液配制过程中要振摇，以促使基质溶解。冬天配制时应适当加温(置于37℃水箱操作)。基质液现配现用，不能保存，过滤后应尽快试验，以免大量沉淀物析出，影响染色效果。

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